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1楼2017-03-17 15:36:09

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5楼: Originally posted by Liumengya at 2017-03-17 23:43:19
你怎么确定没连上，筛选是个很重要的步骤

转化完了蓝白斑筛选没长菌。

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9楼2017-03-18 20:17:15

查看全部 19 个回答

十四_14

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连接时比较关键的是载体和目的片段的比例连接酶的话0.5微升就可以
所以我觉得连不上应该不是连接酶的问题

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2楼2017-03-17 15:41:16

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-17 15:41:16
连接时比较关键的是载体和目的片段的比例连接酶的话0.5微升就可以
所以我觉得连不上应该不是连接酶的问题

感谢回答。之前做得载体和基因比例都是1：6，今天再做一次1：3的，看看能不能连上。

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3楼2017-03-17 15:50:48

jcstone1027

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我们最近也在做连接，我们的体系是25微升，我觉得载体根据浓度还是尽量少加点，我们也一直连接效率非常低，阳性克隆非常少，你需要验证下是不是连接酶是不是有问题。

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4楼2017-03-17 22:39:21