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sunbeartao

新虫 (小有名气)

[求助] takara 的T4 ligase使用的一些问题

打算买takara的T4 ligase(订单号D2160A),看说明书发现连接完后还有些步骤
使用例:
DNA片段和载体DNA的连接  
1.   在微量离心管中配制下列反应液。

DNA片段  ( 粘性末端)*               约0.3    pmol
载体DNA (粘性末端)*   约0. 03    pmol
10×E.coli  DNA Ligase Buffer               2.0     μ l
10× BSA (0.05% )                 2.0  μ l
E.coli  DNA Ligase  1  μ l
H 2 O                      up to  20    μ l

* DNA 片段的摩尔数应控制在载体 DNA摩尔数的 3~10倍。
但每次连接时使用的载体 DNA的量不应低于 0.03 pmol。
2.   16℃过夜反应。
3.   取5~10  μ l DNA 连接液转化至 100   μ l 的感受态细胞中。
不知各位前辈这些步骤做吗?还是和solution i 一样连完直接转化,这些步骤目的又是什么?还有takara的e.coli ligase好用不?

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sunbeartao

新虫 (小有名气)

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2楼2013-04-24 16:15:26
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