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takara 的T4 ligase使用的一些问题
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打算买takara的T4 ligase（订单号D2160A），看说明书发现连接完后还有些步骤 使用例： DNA片段和载体DNA的连接 1. 在微量离心管中配制下列反应液。 DNA片段 ( 粘性末端)* 约0.3 pmol 载体DNA (粘性末端)* 约0. 03 pmol 10×E.coli DNA Ligase Buffer 2.0 μ l 10× BSA （0.05% ） 2.0 μ l E.coli DNA Ligase 1 μ l H 2 O up to 20 μ l * DNA 片段的摩尔数应控制在载体 DNA摩尔数的 3～10倍。 但每次连接时使用的载体 DNA的量不应低于 0.03 pmol。 2. 16℃过夜反应。 3. 取5～10 μ l DNA 连接液转化至 100 μ l 的感受态细胞中。 不知各位前辈这些步骤做吗？还是和solution i 一样连完直接转化，这些步骤目的又是什么？还有takara的e.coli ligase好用不？  E19H2RQ176@I~}}PBL@4Y_H.jpg |
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sunbeartao
新虫 (小有名气)
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2楼2013-04-24 16:15:26