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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA印迹实验，T4 ligase和切刻内切酶 分别与DNA 反应后跑胶，结果却不理想，求释惑
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zwd4970

银虫 (正式写手)

[求助] DNA印迹实验，T4 ligase和切刻内切酶 分别与DNA 反应后跑胶，结果却不理想，求释惑

共八格，第一格留空（加样时可能溢出一些到第一格了）。从左往右：ligase空白对照 1u 2u 4u ,nicking enzyme空白对照 1u 2.5u 5u .

跑胶.jpg
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阳光需要我们走出去感受
1楼 2013-01-12 11:36:17
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zwd4970

银虫 (正式写手)
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阳光需要我们走出去感受
2楼2013-01-16 11:34:42
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weebug

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zwd4970: 金币+10, ★★★很有帮助, 总之谢谢啦 2013-04-12 19:57:40
酶切时间的长短该斟酌下，没跑DNA ladder做对照吗？template dna样本的260/280值如何呢？是从载体做酶切吗？ 能否描述实验大致的过程呢？
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天蓝蓝兮日头晒
3楼2013-01-16 13:07:59
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zwd4970

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2013-01-16 13:07:59
酶切时间的长短该斟酌下，没跑DNA ladder做对照吗？template dna样本的260/280值如何呢？是从载体做酶切吗？ 能否描述实验大致的过程呢？

这个是变性胶，但是跑出来就是一团，看不到两条单链的带。不知道为什么。
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阳光需要我们走出去感受
4楼2013-01-18 12:22:37
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weebug

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

不知胶的浓度如何。 有没negative和positive control作为参照？ 。
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2013-01-18 13:49:31
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zwd4970

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2013-01-18 13:49:31
不知胶的浓度如何。 有没negative和positive control作为参照？ 。

尿素 3.36g,水 1 ml,5*TBE 1.6 ml,30%丙烯酰胺 5.33ml,APS 160 ul,TEMED 16 ul.这是制胶的配方。从左往右：ligase空白对照 1u 2u 4u ,nicking enzyme空白对照 1u 2.5u 5u 。空白对照就是没有加相应的酶。
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阳光需要我们走出去感受
6楼2013-01-19 10:07:37
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