应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：PCR扩增不出条带
151/2返回列表12下一页
查看: 2874  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

labglion

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助：PCR扩增不出条带 已有3人参与

本人新手，最近在扩增RNA病毒中的两段基因分别为VP1和3D，提取的RNA用通用引物反转录得到cDNA，用检测引物可以看出条带很亮，但用扩增基因全长的引物就扩不出来了，反转录引物是用的Oligo dT，也尝试过自己设计的下游引物，PCR引物试了好多，酶也换过几种，退火温度梯度做过50-60度的，DMSO也试过，本来觉得很简单的一点实验一直卡在这不动了，自己都快没有信心了。求大神们不吝赐教。

求助：PCR扩增不出条带
30865196.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-02-28 17:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
试试在前后各设计一对引物看是否可以扩出来。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-03-04 16:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

labglion

新虫 (初入文坛)
自己顶顶，没有大神来帮忙么？ 想问一下除了引物问题，会不会有可能是RNA在提取过程断裂了呢？检测引物扩增片段长度为358bp，而我想扩增的两段基因长度分别为762bp和1407bp，有没有这个可能呢？
赞一下 回复此楼
2楼2017-03-04 15:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
检测引物是什么鬼？这么短的片段应该很容易扩出来的，是在做不出来可以用融合PCR，找找相关的文献，直接拿别人的条件应该可以做的出来

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-04 16:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labglion

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-04 16:15:37
检测引物是什么鬼？这么短的片段应该很容易扩出来的，是在做不出来可以用融合PCR，找找相关的文献，直接拿别人的条件应该可以做的出来

检测引物是我在拿到病料之后用来检测是否含有这种病毒的引物。相关文献找过，用了不少别人的引物也是扩不出来。
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-04 16:41:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

不知道楼主问题解决没？我也遇到相同的情况，前中后三个位置分别设计了引物，中间一段跨越内含子，片段200bp左右，都可以p的出来，但是全长就是p不出来，现在正在从基因组上进行两段pcr，之后连接~
赞一下 回复此楼
···
6楼2017-03-09 08:56:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labglion

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-04 16:44:44
试试在前后各设计一对引物看是否可以扩出来。

这几天尝试过你说的这种方法，还是没有扩增出来。我怀疑不是引物的问题，因为真的已经尝试过了对很多引物了，有自己设计的，也有文献上的。这么多引物，总该有合适的吧？
赞一下 回复此楼
7楼2017-03-09 15:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labglion

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小冀- at 2017-03-09 08:56:11
不知道楼主问题解决没？我也遇到相同的情况，前中后三个位置分别设计了引物，中间一段跨越内含子，片段200bp左右，都可以p的出来，但是全长就是p不出来，现在正在从基因组上进行两段pcr，之后连接~

问题还没有解决，依旧是扩不出来。我做的是病毒，按说应该更简单一些，快失去信心了
赞一下 回复此楼
8楼2017-03-09 15:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by labglion at 2017-03-09 15:45:11
问题还没有解决，依旧是扩不出来。我做的是病毒，按说应该更简单一些，快失去信心了...

彼此彼此，一起加油吧，祝好
赞一下 回复此楼
···
9楼2017-03-09 16:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

中洪小刘

新虫 (小有名气)
您好，有考虑过专业的生物公司提供帮助吗，我这边希望能帮到您！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-03-09 17:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 labglion 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭