24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2828  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

labglion

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:PCR扩增不出条带 已有3人参与

本人新手,最近在扩增RNA病毒中的两段基因分别为VP1和3D,提取的RNA用通用引物反转录得到cDNA,用检测引物可以看出条带很亮,但用扩增基因全长的引物就扩不出来了,反转录引物是用的Oligo dT,也尝试过自己设计的下游引物,PCR引物试了好多,酶也换过几种,退火温度梯度做过50-60度的,DMSO也试过,本来觉得很简单的一点实验一直卡在这不动了,自己都快没有信心了。求大神们不吝赐教。

求助:PCR扩增不出条带
30865196.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labglion

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-04 16:44:44
试试在前后各设计一对引物看是否可以扩出来。

这几天尝试过你说的这种方法,还是没有扩增出来。我怀疑不是引物的问题,因为真的已经尝试过了对很多引物了,有自己设计的,也有文献上的。这么多引物,总该有合适的吧?
7楼2017-03-09 15:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

labglion

新虫 (初入文坛)

自己顶顶,没有大神来帮忙么? 想问一下除了引物问题,会不会有可能是RNA在提取过程断裂了呢?检测引物扩增片段长度为358bp,而我想扩增的两段基因长度分别为762bp和1407bp,有没有这个可能呢?
2楼2017-03-04 15:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

检测引物是什么鬼?这么短的片段应该很容易扩出来的,是在做不出来可以用融合PCR,找找相关的文献,直接拿别人的条件应该可以做的出来

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-04 16:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labglion

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-04 16:15:37
检测引物是什么鬼?这么短的片段应该很容易扩出来的,是在做不出来可以用融合PCR,找找相关的文献,直接拿别人的条件应该可以做的出来

检测引物是我在拿到病料之后用来检测是否含有这种病毒的引物。相关文献找过,用了不少别人的引物也是扩不出来。
4楼2017-03-04 16:41:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +8 15188958825 2026-03-25 8/400 2026-03-29 01:36 by fmesaito
[考研] 332求调剂 +6 蕉蕉123 2026-03-28 6/300 2026-03-29 00:37 by 544594351
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +4 大馋小子 2026-03-28 4/200 2026-03-29 00:32 by 544594351
[考研] 070300化学354求调剂 +3 101次希望 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:28 by 544594351
[考研] 数一英一271专硕(085401)求调剂,可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 一志愿郑州大学,080500学硕,总分317分求调剂 +5 举个栗子oi 2026-03-24 6/300 2026-03-28 23:03 by lizhi8172
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +6 脚滑的守法公民 2026-03-27 6/300 2026-03-28 11:02 by gjlllb
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 0703化学求调剂,各位老师看看我!!! +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 352求调剂 +4 大米饭! 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
信息提示
请填处理意见