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PCR扩增条带不清晰的一点问题 已有1人参与
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上一周提的斑马鱼RNA，当时浓度非常好，直接反转录得到了cDNA模版，之后引物扩增，有较清晰的目的条带，再次跑了5管，但是不太清晰了，切胶回收，连接转化然后摇菌，菌长的不多，检测的时候就没有了，只有二聚体。再次调整体系，循环数由35减到了30，效果不好。我想问问各位： 1. cDNA模版一般要稀释多少倍？我直接用的原液是不是有点浓？ 2. PCR的体系怎么摸索能使条带清晰？ 3.菌的多少是不是跟模版浓度有关？ 4.还有好的建议我很愿意采纳！ 图就不放了， 都是二聚体  |
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