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融合PCR引物的设计已有4人参与
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需要在基因A和基因B之间加上一个linker，就是“基因A+linker+基因B”。linker的编码序列为CTGGTGCCGCGTGGTAGC。现在只有基因A和基因B的模板，想通过重叠延伸PCR将3个片段连接起来，但不知道具体该怎样设计引物，求助各位高手提供宝贵意见。 A基因:ATGCCGTTTGTGAATAAACAGTTTAATTACAAGGATCCGGTGAATGGCGTGGACATCGCCTATATTAAAATCCCGAACGCCGGCCAGATGCAGCCGGTGAAGGCATTTAAGATTCATAATAAAATTTGGGTTATCCCGGAGCGTGACACCTTTACAAACCCTGAAGAAGGTGACCTGAATCCTCCGCCGGAAGCAAAACAGGTGCCGGTTAGCTACTACGACAGCACCTACCTGAGCACCGATAACGAGAAAGACAATTATCTGAAAGGTGTGACCAAACTGTTTGAACGTATTTACAGCACCGATCTGGGCCGTATGCTGCTGACAAGCATCGTTCGTGGCATTCCGTTTTGGGGTGGCAGCACCATTGACACCGAGCTGAAAGTGATTGACACAAACTGCATTAATGTGATTCAGCCGGATGGCAGCTATCGTAGTGAGGAGCTGAACCTGGTGATTATCGGCCCGAGCGCCGATATTATCCAGTTCGAATGCAAAAGCTTCGGCCACGAAGTGCTGAATCTGACCCGCAATGGCTACGGTAGCACCCAGTATATTCGCTTCAGCCCGGACTTCACCTTCGGCTTCGAAGAGAGCCTGGAGGTTGATACCAATCCGTTACTGGGTGCCGGTAAGTTTGCCACCGATCCGGCAGTGACCCTGGCCCATGAATTAATCCACGCCGGCCATCGTCTGTACGGCATCGCCATCAATCCGAACCGCGTTTTTAAAGTTAATACAAACGCCTATTATGAGATGAGCGGCCTGGAAGTTAGCTTCGAAGAGCTGCGCACCTTTGGCGGCCATGACGCCAAATTCATCGACAGCCTGCAGGAAAATGAGTTTCGCCTGTATTATTACAATAAATTTAAAGACATCGCAAGCACACTGAACAAAGCAAAAAGCATTGTTGGCACCACCGCCAGCCTGCAGTACATGAAGAACGTGTTTAAAGAAAAATATCTGCTGAGCGAAGACACCAGCGGCAAGTTTAGCGTTGACAAACTGAAATTCGACAAACTGTATAAGATGCTGACCGAGATCTACACAGAGGACAACTTTGTTAAATTTTTCAAAGTTCTGAATCGCAAAACCTATCTGAACTTTGATAAAGCCGTTTTCAAAATTAATATTGTGCCTAAGGTTAACTATACTATTTACGATGGTTTTAACCTGCGCAACACCAACCTGGCAGCAAACTTTAATGGCCAAAATACCGAAATTAATAATATGAATTTTACCAAACTGAAAAATTTCACCGGTCTGTTCGAGTTCTACAAGCTGCTGTGCGTGCGTGGCATCATCACCAGCAAA B基因:GCCTTAAACGATCTGTGCATTAAAGTTAACAACTGGGATCTGTTCTTTAGTCCGAGTGAAGATAATTTCACCAATGATCTGAATAAGGGCGAAGAAATTACCAGCGATACAAATATTGAGGCCGCCGAGGAGAACATTAGCTTAGATTTAATTCAGCAATATTACCTGACCTTCAACTTCGACAACGAGCCGGAGAACATCAGCATCGAGAATCTGAGCAGCGATATCATCGGCCAGCTGGAACTGATGCCGAACATCGAGCGCTTTCCTAACGGTAAGAAATATGAGCTGGACAAATATACCATGTTTCACTATCTGCGCGCCCAGGAATTTGAGCACGGTAAGAGCCGCATCGCCCTGACAAATAGCGTGAACGAGGCCCTGCTGAACCCTAGCCGCGTGTACACATTTTTCAGCAGCGATTACGTGAAAAAAGTTAACAAGGCCACAGAGGCCGCCATGTTCTTAGGCTGGGTTGAGCAGCTGGTGTATGACTTCACCGATGAGACCAGCGAAGTGAGCACCACCGACAAGATTGCCGACATTACCATCATCATCCCTTATATTGGCCCGGCCCTGAATATCGGTAATATGCTGTATAAAGATGACTTCGTGGGCGCACTGATCTTCAGCGGTGCCGTGATTCTGCTGGAGTTTATCCCGGAGATCGCAATCCCGGTGCTGGGCACATTTGCACTGGTGAGCTATATCGCCAACAAAGTGCTGACCGTTCAGACCATCGACAACGCACTGAGCAAACGTAATGAAAAATGGGATGAGGTGTATAAATATATCGTGACCAACTGGCTGGCCAAAGTGAATACCCAGATCGACTTAATCCGCAAGAAGATGAAGGAAGCCCTGGAAAACCAGGCAGAAGCCACAAAAGCCATCATCAACTATCAATACAATCAATATACCGAAGAAGAGAAAAATAATATTAATTTTAATATCGATGATTTAAGCAGTAAACTGAATGAAAGTATTAATAAAGCCATGATCAATATTAATAAGTTTCTGAATCAGTGTAGCGTGAGCTATCTGATGAACAGCATGATCCCGTACGGCGTGAAGCGTCTGGAAGATTTCGATGCCAGCCTGAAGGATGCACTGTTAAAATATATTTACGATAATCGCGGCACCCTGATCGGTCAGGTTGATCGCCTGAAAGATAAGGTGAATAACACCTTAAGCACCGATATCCCGTTTCAGCTGAGCAAATACGTGGACAACCAGCGCCTGCTGAGTACCTTTACCGAGTACATCAAAAACATTATTAATACCAGCATCTTAAACCTGCGCTACGAGAGTAATCACCTGATCGACCTGAGCCGCTACGCCAGCAAGATCAACATCGGCAGCAAAGTGAACTTTGATCCGATTGATAAGAATCAGATTCAGCTGTTTAACTTAGAAAGCAGTAAAATTGAGGTGATTCTGAAAAATGCCATCGTGTACAATAGCATGTATGAAAATTTCAGCACCAGTTTTTGGATCCGCATCCCGAAGTACTTCAATAGCATCAGTTTAAACAATGAGTATACCATTATTAACTGTATGGAAAATAACAGTGGCTGGAAAGTGAGCCTGAATTACGGTGAGATCATCTGGACACTGCAGGATACCCAGGAGATTAAACAGCGCGTTGTTTTTAAGTATAGCCAGATGATCAACATCAGCGACTATATTAATCGTTGGATTTTCGTTACCATCACCAATAATCGCCTGAACAATAGTAAAATCTATATTAACGGCCGCCTGATCGACCAGAAACCGATCAGCAACCTGGGTAACATTCATGCCAGCAACAATATCATGTTTAAGTTAGATGGTTGCCGCGACACCCACCGCTATATTTGGATCAAATATTTCAACCTGTTCGACAAAGAATTAAATGAAAAAGAAATTAAAGACCTGTATGATAATCAAAGCAATAGTGGCATCCTGAAAGATTTTTGGGGCGACTACCTGCAGTATGATAAGCCGTACTATATGTTAAATCTGTACGATCCTAATAAATATGTTGATGTGAACAACGTGGGCATTCGCGGCTACATGTATCTGAAGGGCCCTCGCGGTAGTGTGATGACCACCAATATCTATCTGAATAGCAGTCTGTATCGCGGTACCAAATTCATCATCAAAAAGTATGCCAGTGGTAATAAAGACAATATCGTTCGTAACAACGATCGCGTGTACATCAACGTGGTGGTGAAGAATAAGGAGTACCGTCTGGCAACAAACGCCAGTCAGGCCGGTGTTGAGAAGATTCTGAGCGCCTTAGAGATCCCGGACGTGGGCAATCTGAGTCAGGTTGTGGTTATGAAAAGCAAAAATGACCAGGGCATTACAAATAAATGCAAGATGAATCTGCAAGATAACAATGGCAATGATATCGGTTTCATTGGCTTTCACCAGTTCAATAACATCGCCAAGCTGGTGGCCAGCAATTGGTACAACCGCCAAATCGAACGTAGCAGCCGCACACTGGGTTGTAGCTGGGAGTTTATTCCGGTTGACGATGGTTGGGGTGAACGCCCGCTGTAA |
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6楼2017-01-21 09:41:40
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已经做了一个多月了，还是链接不上，引物没有错误，让一个博士看了一下，引物没有设计错误，可就是融合不上，然后买了infusion 试剂盒，还是连接不上。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-01-21 09:43:36