应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 两个基因融合PCR引物设计
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 6252  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

maidi12

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢
1楼 2015-08-30 11:14:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

往事随风_12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以设计两对引物，第一对引物以A基因为模版进行pcr，A-F-Primer正常设计（如果想构建到载体上可以加入特定的酶切位点），A-R-primer由A基因的3‘端一段序列和B基因的5’端的一段序列组成（这个就是overlap的部分），另外再设计一对引物，B基因为模版进行pcr，B-F-primer由A基因3‘端序列和B基因5’端序列组成（保证overlap的片段在15-20bp应该就可以），B-R-primer正常设计加酶切位点以便于插入到载体上。pcr步骤分两轮，第一轮先分别用各自的引物扩增A和B两个基因，第二轮再将A和B基因一起加入作为模版，用A-F-primer和B-R-primer两个引物进行pcr。
不知道解释的是否清楚，希望对你有帮助，或者你可以搜下重组pcr的原理。
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2015-08-30 12:09:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

仇峰12306

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 往事随风_12 at 2015-08-30 12:09:36
你可以设计两对引物，第一对引物以A基因为模版进行pcr，A-F-Primer正常设计（如果想构建到载体上可以加入特定的酶切位点），A-R-primer由A基因的3‘端一段序列和B基因的5’端的一段序列组成（这个就是overlap的部分 ...

想请教您关于重叠延伸PCR的问题可以吗、
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-10 09:59:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

199006287956

木虫 (著名写手)
设计引物和楼上一样，融合完成我们用了三步，第一步是用引物批出A和B，第二步是A和B的融合，不加任何引物。第三步是拿第二步融合的PCR溶液做模板，用AF和BR作为引物扩增。而且我们增加了巣式引物的设计。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
追求不惜，奋斗不息
4楼2015-09-18 12:34:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Gaory0906

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 199006287956 at 2015-09-18 12:34:11
设计引物和楼上一样，融合完成我们用了三步，第一步是用引物批出A和B，第二步是A和B的融合，不加任何引物。第三步是拿第二步融合的PCR溶液做模板，用AF和BR作为引物扩增。而且我们增加了巣式引物的设计。
...

请问 什么是巢式引物？
赞一下 回复此楼
搞死科研
5楼2015-10-29 05:04:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

199006287956

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Gaory0906 at 2015-10-29 05:04:03
请问 什么是巢式引物？...

百度一下，巣式引物，就知道了。比较简单。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
追求不惜，奋斗不息
6楼2015-10-29 08:09:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Gaory0906

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 199006287956 at 2015-10-29 08:09:06
百度一下，巣式引物，就知道了。比较简单。
...

谢谢
回复此楼
搞死科研
7楼2015-10-29 09:07:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 maidi12 的主题更新
71/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 求调剂 330分 085600材料与化工 +3 gqhhh 2026-03-22 3/150 2026-03-29 00:52 by 544594351
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +4 Shern—- 2026-03-28 4/200 2026-03-29 00:47 by 544594351
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 7/350 2026-03-28 21:40 by zhq0425
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +7 1428151015 2026-03-27 7/350 2026-03-28 19:58 by S240
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 4/200 2026-03-28 14:30 by QiMing7
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 材料与化工考研调剂 +17 孅華 2026-03-22 17/850 2026-03-28 08:35 by WYUMater
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭