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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 两个基因融合PCR引物设计
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maidi12

禁虫 (小有名气)
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1楼2015-08-30 11:14:25
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Gaory0906

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 199006287956 at 2015-09-18 12:34:11
设计引物和楼上一样，融合完成我们用了三步，第一步是用引物批出A和B，第二步是A和B的融合，不加任何引物。第三步是拿第二步融合的PCR溶液做模板，用AF和BR作为引物扩增。而且我们增加了巣式引物的设计。
...

请问 什么是巢式引物？
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搞死科研
5楼2015-10-29 05:04:03
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往事随风_12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以设计两对引物，第一对引物以A基因为模版进行pcr，A-F-Primer正常设计（如果想构建到载体上可以加入特定的酶切位点），A-R-primer由A基因的3‘端一段序列和B基因的5’端的一段序列组成（这个就是overlap的部分），另外再设计一对引物，B基因为模版进行pcr，B-F-primer由A基因3‘端序列和B基因5’端序列组成（保证overlap的片段在15-20bp应该就可以），B-R-primer正常设计加酶切位点以便于插入到载体上。pcr步骤分两轮，第一轮先分别用各自的引物扩增A和B两个基因，第二轮再将A和B基因一起加入作为模版，用A-F-primer和B-R-primer两个引物进行pcr。
不知道解释的是否清楚，希望对你有帮助，或者你可以搜下重组pcr的原理。
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2楼2015-08-30 12:09:36
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 往事随风_12 at 2015-08-30 12:09:36
你可以设计两对引物，第一对引物以A基因为模版进行pcr，A-F-Primer正常设计（如果想构建到载体上可以加入特定的酶切位点），A-R-primer由A基因的3‘端一段序列和B基因的5’端的一段序列组成（这个就是overlap的部分 ...

想请教您关于重叠延伸PCR的问题可以吗、
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3楼2015-09-10 09:59:32
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199006287956

木虫 (著名写手)
设计引物和楼上一样，融合完成我们用了三步，第一步是用引物批出A和B，第二步是A和B的融合，不加任何引物。第三步是拿第二步融合的PCR溶液做模板，用AF和BR作为引物扩增。而且我们增加了巣式引物的设计。

发自小木虫Android客户端
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追求不惜，奋斗不息
4楼2015-09-18 12:34:11
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