| 查看: 1627 | 回复: 2 | ||
jhonsmith001金虫 (小有名气)
|
[求助]
询问融合PCR反应体系和条件
|
| 哪位高手能帮我下：如果想将两个400bp和一个5000bp的片段通过融合PCR连接起来，两个短片段和一个长片段的加入量一般怎么算的呢？还有看有些讨论说用两步PCR反应，即加引物和不加引物反应，那这两个PCR条件怎么设计呢？我的这三个片段的连接部位有20bp。非常感谢高手们能帮我解决这个头疼问题！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有188人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
PCR反应体系中各种成分的作用-搜集版
已经有490人回复- PCR扩增融合基因
已经有21人回复
- 荧光定量PCR的反应板和反应板的封膜大家用的哪个厂家的呀？
已经有7人回复
- 关于融合PCR的问题
已经有14人回复
- 融合pcr怎么总是不成功啊
已经有9人回复
- 【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR反应体系的配制
已经有11人回复
- 【求助/交流】PCR加各种反应溶液时为什么要在冰浴环境中进行??
已经有11人回复
我是传奇456
金虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1480.6
- 红花: 2
- 帖子: 456
- 在线: 211.6小时
- 虫号: 1867241
- 注册: 2012-06-22
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jhonsmith001: 金币+12, ★有帮助 2013-01-15 11:37:43
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-15 13:53:44
jhonsmith001: 金币+12, ★有帮助 2013-01-15 11:37:43
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-15 13:53:44
|
1.长片段和短片段的量都一样； 2.PCR反应都必须加入引物，你的意思是有些人说第一步可不加两端的引物吧？ 3.PCR条件注意好退火温度即可。第一步根据各片段不同用不同条件，成功P出重叠部分，不过此步一定得用Pfu酶；第二步就直接用两端引物，根据三个片段大小以及Taq酶的合成速率来设计延伸时间。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
jhonsmith0012楼2013-01-07 16:38:15
jhonsmith001
金虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1088.9
- 散金: 72
- 红花: 2
- 帖子: 224
- 在线: 234.6小时
- 虫号: 542013
- 注册: 2008-04-08
- 专业: 合成药物化学
3楼2013-01-15 11:36:30