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怎么用PCR的方法构建一种兼具人超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的双功能融合蛋白?
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用PCR的方法构建一种兼具人超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(Catalase, CAT)活性的双功能融合蛋白CAT-PTD-SOD,其中的PTD是序列为RKKRRQRRR的短肽 。然后把该基因转化进入大肠杆菌表达菌株CTS。要求讨论实验步骤,可能的结果。PTD基因的编码序列为5’-AGAAAGAAGAGAAGACAAAGAAGAAGA-3’。SOD,CAT的序列可以上NCBI查询! SOD: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/X02317? CAT: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AY028632? 提示:融合基因的扩增是一个重叠PCR的反应。引物的个数及设计很关键,要求写详细一点:每对引物及PCR反应。 |
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