| 查看: 1127 | 回复: 4 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
jcstone1027铁杆木虫 (正式写手)
木虫
|
[交流]
两位点的定点突变 已有3人参与
|
||
|
想突变基因片段上两个相隔比较远的位点，用DPN1法，因为做一个位点扩增出的是带缺刻的质粒，对于另外一个位点无法以此缺刻质粒为模板突变第二处位点，想过用磷酸化的引物，让第一遍形成的缺刻质粒闭合成环，再以此环状质粒为模板突变第二处位点，大家觉得第一步扩出的缺刻质粒闭合成环可以实现吗，有谁这样做过？十分想知道答案，谢谢大家！ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有268人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 定点突变
已经有3人回复
- 定点突变相关问题
已经有2人回复
- 转载：转基因植物影响人体健康的可能方式
已经有4人回复
- 求高手帮助，关于定点突变引物设计
已经有0人回复
- 中国科学家用TALEN技术治疗地中海贫血取得重要进展
已经有1人回复
- 西北农林科技大学 Nat Commun 发布锌指打靶生产抗病转基因牛新策略
已经有10人回复
- PCR定点诱变
已经有4人回复
- 克隆求助，都两个多月了
已经有33人回复
- 一个质粒多个位点如何突变
已经有10人回复
- 一个质粒上多个位点如何突变
已经有0人回复
- 一个质粒上多个位点同时突变
已经有1人回复
- 请问如何进行蛋白突变体不同温度下稳定性的分子模拟
已经有2人回复
- 新人关于引物设计的问题
已经有0人回复
- 我想翻译下面的内容，谢谢！不要网上的翻译
已经有3人回复
- 分子克隆技术步骤
已经有2人回复
- 【求助/交流】定点突变-DpnI消化
已经有12人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 浙江大学2006年分子生物学考博
已经有8人回复
jiananx
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 377.9
- 帖子: 164
- 在线: 25.7小时
- 虫号: 4897970
- 注册: 2016-08-05
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
请教一下缺刻质粒是什么意思呢？我曾经是先突变一个位点，跑胶如果条带清晰，直接消化后，转化再提取，测序筛选突变成功的再进行第二次突变。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2016-11-25 22:51:35
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - MolEPI: 3
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
2楼2016-11-25 00:29:33
jcstone1027
铁杆木虫 (正式写手)
木虫
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 7128.8
- 散金: 20
- 红花: 4
- 帖子: 873
- 在线: 142小时
- 虫号: 3433903
- 注册: 2014-09-22
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
|
我的意思是第一次扩完重组质粒后，它形成的是带缺刻的质粒，我不想立即做转化测序，而是想拿扩增完的缺刻质粒再扩，把第二处位点也变回来，因为第一遍形成的是缺刻质粒，再用这个模板突变另外一处位点，原理上不能实现，也就是说用带磷酸化的引物扩重组质粒，扩增产物能形成完整的环状质粒吗？我是这个意思，谢谢你的回答 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-11-25 12:10:55
mailmrcai
铜虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1591.8
- 散金: 472
- 红花: 1
- 沙发: 2
- 帖子: 533
- 在线: 65小时
- 虫号: 5257104
- 注册: 2016-11-19
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
这个不太可行吧，没试过，一般都是第一步克隆好，再克隆第二步，也不麻烦多少。其实我觉得如果这样也可以，那还不如直接加四条引物pcr，总会有阳性克隆，可能比例会低点 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-11-25 22:55:56
