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PCR定点诱变
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最近做PCR定点诱变，做最后的拼接PCR时，总是会出现很强的一条非特异条带，主带反而模糊不清楚。如图： 1道为maker，23道，45道和67道分别为三个扩增样品。 45道和67道扩增大小是对的，23的主带太弱了。三者都带有标签蛋白，只不过23在N端，45和67在C端。除了两端扩增引物外，中间使用的扩增引物完全相同。C端的突变构建一直很顺利。N端在引入第一个突变位点的时候也会顺利，但是继续构建的时候就出现如图所示的问题，一直扩增不出来。不知道是什么问题，各位有没有什么好的解决办法。 扩增条件：预变性后接着10个无引物循环，50度退火，之后加入引物扩增30个循环，60度退火。 第一轮的PCR产物切胶纯化后稀释到10ng使用，每个反应体系加入10-15ng  1.png |
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2楼2013-12-02 15:35:07
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-05 00:54:00
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3楼2013-12-03 16:00:39
4楼2013-12-04 23:28:01
2如果突变位点在全长基因的中间位置，突变位置也位于引物中间，上下游引物再互补，这样直接设计出来的引物能用吗？ 5楼2013-12-06 15:54:48
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