应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变
41/1返回列表
查看: 1079  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yuman0709

铁虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变 已有3人参与

做定点突变，用的是Pfu聚合酶，引物里含突变位点，两引物GC含量分别是72.5%  65.1%，我用的退火温度是60度，第一次是P出条带了，但样品被我不小心扔了，用同样条件重新做PCR，但后来怎么P都是弥散的条带，用Primistar,也是弥散条带，一直都是弥散条带，请求大神指导
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-01-07 20:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BESTWWZ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-12 22:42:16
我最近也在做定点突变，上一次尝试了温度梯度PCR，从55℃一直到62℃，在60℃以上就是弥散带，但是更低的温度是可以P出来的，所以推荐你试下温度梯度，更低的温度也许能P出来
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-02-06 10:26:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-12 22:42:32
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2016-02-10 02:57:25
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

土豆专业户

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-12 22:42:54
前一阵子做了几个突变，过程还算顺利。不知道楼主采用的是哪种突变方法，我用的是方法来自这篇文献An efficient one-step site-directed deletion, insertion, single and multiple-site plasmid mutagenesis protocol希望能对你有所帮助，有不明白的地方还可以交流。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-02-12 11:46:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuman0709 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +7 布布和一二 2026-08-06 10/500 2026-08-06 16:22 by janehuiminli
[基金申请] 听说今天filecode变了 +3 布布和一二 2026-08-06 3/150 2026-08-06 16:22 by yq199112088
[基金申请] filecode +8 等待解的谜 2026-08-06 12/600 2026-08-06 16:11 by janehuiminli
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +4 Tide man 2026-08-06 5/250 2026-08-06 16:08 by janehuiminli
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭