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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点突变
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yuman0709

铁虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变 已有3人参与

做定点突变，用的是Pfu聚合酶，引物里含突变位点，两引物GC含量分别是72.5%  65.1%，我用的退火温度是60度，第一次是P出条带了，但样品被我不小心扔了，用同样条件重新做PCR，但后来怎么P都是弥散的条带，用Primistar,也是弥散条带，一直都是弥散条带，请求大神指导
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1楼 2016-01-07 20:28:25
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土豆专业户

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-12 22:42:54
前一阵子做了几个突变，过程还算顺利。不知道楼主采用的是哪种突变方法，我用的是方法来自这篇文献An efficient one-step site-directed deletion, insertion, single and multiple-site plasmid mutagenesis protocol希望能对你有所帮助，有不明白的地方还可以交流。
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4楼2016-02-12 11:46:11
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BESTWWZ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-12 22:42:16
我最近也在做定点突变，上一次尝试了温度梯度PCR，从55℃一直到62℃，在60℃以上就是弥散带，但是更低的温度是可以P出来的，所以推荐你试下温度梯度，更低的温度也许能P出来
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2楼2016-02-06 10:26:38
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-12 22:42:32
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3楼2016-02-10 02:57:25
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