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silulu23

新虫 (小有名气)

[交流] 定点突变相关问题

最近要开始做定点突变了,我的DNA加质粒有14kb,想突变一个氨基酸,需要突变掉两个碱基,挑了好多试剂盒,还是不太清楚,Agilent的貌似口碑不错,看了看他们的说明书,多位点的好像至多能用8KB的模板,XL款的大于8Kb的好像又只能是单个定点突变,不知道有没有哪位师兄师姐有这方面的经验可以传授一下?感激不尽~~
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silulu23

新虫 (小有名气)

有做突变的师兄师姐们吗,请不吝赐教,感激~~~

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2楼2015-11-05 10:25:26
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大脸猫ld

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
之前也做过一个13kb质粒的定点突变,突两个位点的,实验室不给专门买试剂盒,所以就自己倒载体。
前提是序列是已知的,寻找包含突变位点的双切片段,注意两边只能是单酶切位点。
把要突变的DNA片段部分剪切下来,然后连接到比较小的载体上,让突变载体小于7KB,突变后测序成功了再倒回原来的载体上。
3楼2015-12-24 09:49:16
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