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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 定点突变相关问题
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silulu23

新虫 (小有名气)

[交流] 定点突变相关问题

最近要开始做定点突变了，我的DNA加质粒有14kb，想突变一个氨基酸，需要突变掉两个碱基，挑了好多试剂盒，还是不太清楚，Agilent的貌似口碑不错，看了看他们的说明书，多位点的好像至多能用8KB的模板，XL款的大于8Kb的好像又只能是单个定点突变，不知道有没有哪位师兄师姐有这方面的经验可以传授一下？感激不尽~~
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Everyday is a new day!
1楼 2015-11-04 17:30:38
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silulu23

新虫 (小有名气)
有做突变的师兄师姐们吗，请不吝赐教，感激～～～

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Everyday is a new day!
2楼2015-11-05 10:25:26
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大脸猫ld

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
之前也做过一个13kb质粒的定点突变，突两个位点的，实验室不给专门买试剂盒，所以就自己倒载体。
前提是序列是已知的，寻找包含突变位点的双切片段，注意两边只能是单酶切位点。
把要突变的DNA片段部分剪切下来，然后连接到比较小的载体上，让突变载体小于7KB，突变后测序成功了再倒回原来的载体上。
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3楼2015-12-24 09:49:16
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