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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建的表达载体， 双酶切出现杂带，求助分析原因
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笀书丶

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建的表达载体， 双酶切出现杂带，求助分析原因已有2人参与

最近在构建表达载体，构建完成后进行单双酶切鉴定， 发现自己的目的条带位置正确，但是发现存在一条杂带，无论单双酶切还是跑质粒，杂带都存在，请问是什么原因？ 如图，是我挑了三个菌落后，提质粒双酶切的图， 5000maker  目的条带在545bp处

构建的表达载体， 双酶切出现杂带，求助分析原因
重组质粒双酶切鉴定.jpg
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1楼2016-11-20 15:20:26
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笀书丶

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鱼》 at 2016-11-20 15:41:17
是不是载体上还有你用的酶的酶切位点

不是 ， 我用的Nco-BamH这两个位点， 载体上不存在这两个位点的，无论用这两种酶单切 还是双切， 杂带都存在， 跑质粒，这条带也存在。
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4楼2016-11-20 17:00:03
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鱼》

新虫 (正式写手)
是不是载体上还有你用的酶的酶切位点

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2楼2016-11-20 15:41:17
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
没有切开的超螺旋质粒吧？

发自小木虫IOS客户端
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3楼2016-11-20 16:21:52
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鱼》

新虫 (正式写手)
你用空载体跑一下对照，验证空载体污染吗

发自小木虫Android客户端
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5楼2016-11-20 17:43:50
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