| 查看: 1021 | 回复: 0 | ||
zhangfeibird铜虫 (小有名气)
|
[求助]
pcDNA3.1-SV40大T抗原表达载体构建，没有菌落产生
|
|
我最近在构建pcDNA3.1-SV40大T抗原表达载体。 pcDNA3.1（+）表达载体BamHI、EcoRI双酶切，胶回收，获得线性片段大小为5200bp左右，浓度为22 ng/ul,溶解于l胶回收试剂盒的Elusion Buffer中。 含有SV40大T抗原（2200bp）序列的PMD18T质粒，BamHI、EcoRI双酶切（产生两条带），胶回收目的带，获得线性片段大小为2200bp，浓度为10 ng/ul,溶解于l胶回收试剂盒的Elusion Buffer中. 连接反应 1、使用T4连接酶（10ul体系），50 ng线性pcDNA3.1，40ng SV40大T抗原线性片段，连接30h。转化，转化无菌落产生。 2、使用Takara TaKaRa DNA Ligation Kit LONG试剂盒，50 ng线性pcDNA3.1，50ng SV40大T抗原线性片段，1ul 试剂盒中的连接酶，连接30h，转化无菌落产生。用试剂盒中的阳性对照做有大量菌落产生。 感受态细胞DH5α，经过验证转化频率大于10^8. 请高手帮我分析一下为什么平板上没有阳性菌落产生？这个实验我做了很久了，是没有连接上？pcDNA3.1-SV40连接产物对感受态细胞DH5α有细胞毒性？还是什么原因？ 非常感谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
酶切PCR产物-连接表达载体
已经有10人回复
- Nde1和BamH1做双酶切，T载上测过序，现在要从T载上切下，连到表达载体PET-23a
已经有21人回复
- 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因·
已经有21人回复
- 片段总是连不到T载体上
已经有22人回复
- 关于目的基因不同向连接到T载体上的问题
已经有19人回复
- 为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！
已经有17人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- 原核表达载体构建，测序不成功
已经有20人回复
- T载体转化DH5之后涂板长不出来是什么原因啊
已经有5人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 菌落PCR无条带
已经有19人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
已经有23人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
