应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因构建到表达载体上一直检测不到过表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3696  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

王旭昉

银虫 (小有名气)

[求助] 基因构建到表达载体上一直检测不到过表达 已有4人参与

今年上半年购买了一个基因的克隆载体，然后交给外包公司，让他们把CDS序列连接到表达载体上面，目的基因N端加了一小段柔性肽和HA标签，后面通过包装慢病毒感染细胞，一直不能检测到HA，换了蛋白本身的的抗体也检测不到蛋白，细胞内和细胞外都没有，想请问一下这个过表达体系是不是哪里缺少东西出了问题？ 之后老师建议把克隆载体直接转染到细胞当中，这样能表达蛋白么，还是应该把构建好的表达载体转染到细胞当中？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我就是我
1楼 2016-10-08 15:56:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-09 22:33:16
xn8008: 应助指数+1 2016-10-10 10:00:10
王旭昉: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-10-13 10:11:36
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王旭昉 at 2016-10-09 12:53:44
你说的意思是做一个瞬时表达，单转染表达载体，然后检测蛋白的情况。...

先顺转293系列细胞，然后做WB，看看是不是有表达。如果有表达，再考虑是不是病毒质粒的问题。我做病毒做的很多，so，可以站短我你的q，交流详细问题比较方便。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-10-09 18:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

王旭昉

银虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-10 09:53:32
目的基因大概1300bp，表达载体是PLVTH 约13000bp
赞一下 回复此楼
我就是我
2楼2016-10-08 15:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-10 09:55:15
xn8008: 应助指数+1 2016-10-10 09:55:22
王旭昉: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-10-13 10:11:48
把构建好的表达载体转染到细胞中，转染48-72h后检测细胞上清、细胞裂解液及沉淀看表达情况。
赞一下 回复此楼
3楼2016-10-09 10:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王旭昉

银虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-10 09:59:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2016-10-09 10:28:19
把构建好的表达载体转染到细胞中，转染48-72h后检测细胞上清、细胞裂解液及沉淀看表达情况。

你说的意思是做一个瞬时表达，单转染表达载体，然后检测蛋白的情况。
赞一下(1人) 回复此楼
我就是我
4楼2016-10-09 12:53:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +14 荷包蛋hyj 2026-03-26 14/700 2026-03-27 17:49 by kiokin
[考研] 求调剂 +6 张zz111 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by 左的岸
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:52 by 醉在风里
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 299求调剂 +6 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 6/300 2026-03-27 12:43 by 果果妈咪
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭