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报告基因的载体的构建
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IHF对病原细菌致病性的分子机理研究 （A）靶基因启动子预测 在上述研究的基础上，找出受IHF调控的靶基因，应用分子生物学软件，对IHF所调控的靶基因启动子进行预测分析，找出其保守的区域。 （B）启动子报告基因构建 分析靶基因启动子区域，将Gus(β-glucuronidase)报道基因（gusA）的编码序列连接到靶基因启动子下游，得到的融合基因分别导入野生型菌株和IHF突变菌株中，定量检测GUS活性；通过截断方式，明确IHF调控的启动子长度，通过生物信息学分析，确定IHF调控的启动子可能序列特征。 （C）IHF与靶基因启动子DNA结合分析 根据上述研究结果，PCR扩增启动子区域，同位素标记，构建IHF表达载体，诱导表达并纯化IHF蛋白，通过凝胶阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）以确定IHF是否直接与启动子DNA结合，来调控下游基因表达。 （D）IHF与启动子结合位置和序列分析 确定能与IHF特异结合的启动子后，通过DNase 1 足迹实验（DNase experiment 1 footprint），进一步明确IHF蛋白在启动子上的结合位置和序列。 希望有大神伸出援助之手，有公司可以做也行，跪求啦！！！！！！  |
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