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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒转化大肠杆菌后长出来的全部是载体自连的产物，怎么回事？
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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒转化大肠杆菌后长出来的全部是载体自连的产物，怎么回事？ 已有1人参与

PCR扩增目的片段，然后纯化，连T载体，再把重组的质粒和空载体质粒酶切，纯化、连接，结果长出的克隆挑12个提取质粒，琼脂糖凝胶电泳检测发现条带大小都一样，而且PCR检测都是空载体。。。怎么回事啊，酶切的很完全啊，就算有空载也不至于这么多吧！
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1楼 2016-07-14 14:28:50
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
你转化时载体与目的基因的比例是多少，转化过程详细点才能告诉你解决办法

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8楼2016-07-19 12:34:45
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y383514131

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-16 07:55:11
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-16 09:26:49
空载体有相应抗性，肯定可以进入感受态细胞。继续挑吧，我前几天挑了几十个，结果切出相应大小片段，测序却不正确。慢慢挑

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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
2楼2016-07-15 23:27:43
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
连接时增大目的片段的比例，连接体系里载体浓度高就容易自连，还有pcr是用的能加t尾的聚合酶吧？

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3楼2016-07-16 11:10:33
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选择远方523

新虫 (初入文坛)
载体要去磷酸化

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4楼2016-07-16 18:44:23
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