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冯英慧1101

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 求大侠解惑重组质粒枯草杆菌转化

我在大肠杆菌中做了质粒重组，质粒pcr，质粒双酶切都说明质粒重组正确，枯草转化的时候平板阴阳对照正常，转化菌株也有长出，但是菌落pcr和菌液pcr都没有结果，pcr都有空载阴性对照和阳性对照，都没问题。

请各位大侠分析下原因！！！！！！！拜托拜托

PS菌落pcr是菌落加入25微升水，煮沸10min，模板25微升体系加入1.25微升菌液；菌液pcr过夜活化，取500微升菌液煮沸20min，模板加2.5微升。前一天菌落pcr后跑胶，有微量目的条带，但与对照比较弱，今天菌液pcr又没结果了。

问下，枯草菌落pcr需要加溶菌酶先溶解吗？据师兄说是不需要。

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1楼 2014-09-24 13:52:31

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