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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌的基因敲除 Red重组
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爱久见人心93

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌的基因敲除 Red重组 已有1人参与

目前正开始做大肠杆菌的基因敲除，JM109作为原始菌株。带有pKD46质粒的JM109做的电转化感受态细胞，第一步准备用kana基因替换敲除的基因。现在电转化后，涂布25ug/ml的kana平板，过夜培养后挑菌做菌落PCR ，电泳图片如下 。目的基因为2243bp,kana加上FRT位点等共计1887bp ,电泳时用的是λ-EcoT14 Ι digest DNA Marker,求助大神分享分析Red重组实验的技巧
大肠杆菌的基因敲除 Red重组
菌落PCR.jpg
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1楼 2013-12-07 16:36:01
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晨朝阳yb

新虫 (初入文坛)
请问JM109做敲除，顺利吗？因为我同时做了JM09和MG1655，但JM109长得非常慢。谢谢~
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2楼2017-03-20 11:34:39
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

实验设计的不是太好吧，敲除前和敲除后片段大小差不多，可能看不出来的，可以直接p卡纳基因，或者p出来送出去测序
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···
3楼2017-03-20 18:01:06
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寥落星晨

木虫 (正式写手)
每次pcr都最好纯化一下在继续

发自小木虫IOS客户端
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4楼2017-03-31 22:43:50
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