[交流] 请问我做pcr的时候有条带，但是胶回收的时候怎么没条带了啊

3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-07 18:05:44
你切胶的时候有条带么？如果有，就是回收过程中出问题了

6楼: Originally posted by sandycool at 2016-04-08 09:01:09
胶回收操作的问题

8楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-08 09:10:24
回收之后没有嘛？是不是试剂盒污染了

9楼: Originally posted by 310013 at 2016-04-08 12:26:38
楼主确定你看到的是条带而不是某些非特异性的东西？不是每个可以看到的 都是核酸条带

11楼: Originally posted by 781055707 at 2016-04-08 14:13:33
你用的是PET系列吧，我一般切4管50UL的体系，胶回收后跑电泳才勉强看得见。

12楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 19:29:12
切的时候有啊，回收的时候也按照说明进行的，都做过几次重复了！
...

17楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-08 22:38:10
你那条带浓度太低了，pcr特异性也不好，先把pcr产物浓度提高一下
...

18楼: Originally posted by shx0743 at 2016-04-08 22:56:16
胶回收之前条带亮么，我以前粗略算过，胶回收效率只有20％，如果你胶回收的带子就不是很明显，那么回收回来的可能性不大！

21楼: Originally posted by sunqx at 2016-04-08 23:00:26
有带较弱

23楼: Originally posted by sunqx at 2016-04-08 23:09:21
你这总共也就二三十ng,能回收回十就了不得了，加三十的水，浓度才三分之一ngul

20楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 22:59:35
条带只有这么亮

...

25楼: Originally posted by shx0743 at 2016-04-09 06:16:01
那肯定不行，上样几微？如果是5ul的话，你多做几管吧，摸一下退火温度，看看哪个温度条带更清晰，我每次p，上样3ul，跑出的带子比marker中最亮的条带亮都要做2管以上才会去胶回收
...

26楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-09 08:19:19
哦，好的，谢谢
...

14楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 19:30:30
新买的盒子啊
...

28楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 09:20:40
你用这个回收过别的吗？如果别的没问题，那试剂盒没问题。还有就是看到你的图，感觉你的条带特别暗，你需要的主带大概在多少啊？...

29楼: Originally posted by 黄启秀 at 2016-04-09 09:53:27
我也有同样问题，楼主解决了么～苦恼

28楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 09:20:40
你用这个回收过别的吗？如果别的没问题，那试剂盒没问题。还有就是看到你的图，感觉你的条带特别暗，你需要的主带大概在多少啊？...

30楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-09 10:07:44
70bp左右
...

33楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 10:46:39
我们回收的片段如果太小的话，我们用的是生工的，说明书上写着需要加异丙醇好像。而且你的片段这么小孩不太亮，如果做PCR方便的话可以多做几个，或者将PCR产物浓缩下试试，切胶点样的时候多点几微升。然后过一个柱 ...

34楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-09 11:03:22
Pcr产物怎么浓缩啊？
...

35楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-04-09 14:26:47
就是你PCR产物洗涤吗?我们之前就是洗涤完了之后加水的时候少加点之前如果是50的话之后就加20-30。但是我们没做过70bp的，我们有200.300的时候一般洗完后加20的水...

1楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-07 17:30:17
请问我做pcr的时候有条带，但是胶回收的时候怎么没条带了啊？

37楼: Originally posted by 小林樱雪 at 2016-04-09 16:29:28
有没有可能是切错了
...

16楼: Originally posted by 雨落wang at 2016-04-08 19:35:35
上面没说体系啊，就是用的天根的试剂盒
...

40楼: Originally posted by 781055707 at 2016-04-10 03:37:21
70BP还胶回收呀，那个膜会过滤掉100BP以下的条带的，连T载体吧，设计下思路看行不行，200BP以下都可能是引物二聚体。...

39楼: Originally posted by Gao-Rui at 2016-04-09 22:08:27
问题不清楚，说的再细点。是胶回收之后嘛？

43楼: Originally posted by 804371539 at 2016-04-10 09:06:54
可能引物二聚体，因为在100bp以下了，回收是有效率的吧，我用的试剂盒有一步是让乙醇挥发干净，不然抑制下游反应。