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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR
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libra小朵

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR

大家好！最近做菌液PCR的时候，P出来结果是ddH2O里面都能P出引物二聚体，没有目的条带，引物是之前设计好的，没有问题，反应体系和条件也是按照之前师姐的方法不变，之前都能P出条带来，但之前没有做过菌液PCR,请问各位大虾有木有懂的，教教我是哪里出了问题啊？、
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1楼 2013-07-16 16:21:16
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hotpcr

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 17:32:52
libra小朵: 金币+5 2013-07-18 18:33:44
希望对你有帮助：
       你为什么还要用菌液做PCR？你还不如摇菌后提取质粒然后用质粒PCR。
       我觉得菌落PCR效果很好，虽然有假阳性的可能，但是只要是做出来，有目的条带一般是对的。
     关于没有目的条带，我觉得很有可能是你的质粒被稀释了，因为在菌落中的浓度比较大；另外也有可能是你根本就没有挑到正确的菌落来摇菌，所以就没有产物。
    再就是的能确定是引物的二聚体么？你是否是从单一的聚落挑出来的？
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我可耐的X/Y染色体啊~
2楼2013-07-16 16:43:53
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 17:33:00
引物二聚体本身就以引物为模板，加水没加菌液也出来二聚体很正常。扩不出来目的带，还是怀疑其他原因吧。
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为什么
3楼2013-07-16 17:28:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水做模板要么什么都没有，要么是有引物二聚体，这很正常。为什么菌液P不出来，可能有其它原因，PCR时最好做master mix，每次都有正对照，保证体系没有问题。
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4楼2013-07-17 04:12:59
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maidi12

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2013-07-17 08:51:07
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libra小朵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hotpcr at 2013-07-16 16:43:53
希望对你有帮助：
       你为什么还要用菌液做PCR？你还不如摇菌后提取质粒然后用质粒PCR。
       我觉得菌落PCR效果很好，虽然有假阳性的可能，但是只要是做出来，有目的条带一般是对的。
     关于没有目的条 ...

P出来的条带小于100kb，应该是二聚体了，听说菌液PCR事先要处理下菌液比较好，我没稀释也没做处理，是不是这个原因呢？
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6楼2013-07-18 18:37:07
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