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libra小朵

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR

大家好!最近做菌液PCR的时候,P出来结果是ddH2O里面都能P出引物二聚体,没有目的条带,引物是之前设计好的,没有问题,反应体系和条件也是按照之前师姐的方法不变,之前都能P出条带来,但之前没有做过菌液PCR,请问各位大虾有木有懂的,教教我是哪里出了问题啊?、
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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水做模板要么什么都没有,要么是有引物二聚体,这很正常。为什么菌液P不出来,可能有其它原因,PCR时最好做master mix,每次都有正对照,保证体系没有问题。
4楼2013-07-17 04:12:59
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hotpcr

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 17:32:52
libra小朵: 金币+5 2013-07-18 18:33:44
希望对你有帮助:
       你为什么还要用菌液做PCR?你还不如摇菌后提取质粒然后用质粒PCR。
       我觉得菌落PCR效果很好,虽然有假阳性的可能,但是只要是做出来,有目的条带一般是对的。
     关于没有目的条带,我觉得很有可能是你的质粒被稀释了,因为在菌落中的浓度比较大;另外也有可能是你根本就没有挑到正确的菌落来摇菌,所以就没有产物。
    再就是的能确定是引物的二聚体么?你是否是从单一的聚落挑出来的?
我可耐的X/Y染色体啊~
2楼2013-07-16 16:43:53
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 17:33:00
引物二聚体本身就以引物为模板,加水没加菌液也出来二聚体很正常。扩不出来目的带,还是怀疑其他原因吧。
为什么
3楼2013-07-16 17:28:11
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maidi12

禁虫 (小有名气)

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本帖内容被屏蔽

5楼2013-07-17 08:51:07
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