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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计问题求助
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voidecho

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物设计问题求助 已有5人参与

我在NCBI上设计了一对引物  其中反向引物为：AATGGGTCCTCCTCCTCCTC     TCC重复太多，会不会对PCR有影响，求助！
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1楼 2016-03-29 11:14:38
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
做了再说

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-03-29 14:18:28
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汪浩的良

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
voidecho: 金币+2 2016-04-01 21:59:57
退火温度有点高，不过应该问题不大，可以先试试梯度PCR，找到合适的退火温度。
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3楼2016-03-29 15:03:25
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
voidecho: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-04-01 21:59:41
理论上是这样的，如果米有合适的你可以试试这对引物，如果退火温度比较高可以两步法，退火延伸合并；也可以做个touchdown程序。
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4楼2016-03-29 16:58:30
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者
理论是理论，终究还是要试一下。

发自小木虫IOS客户端
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有时一本正经，有时胡言乱语。
5楼2016-03-30 14:15:30
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pond

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
当然有影响了！会发生这对引物之间配对，那样就p不出来了
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6楼2016-03-30 16:23:58
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tbsjxy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
voidecho: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-04-01 22:00:12
会形成引物二聚体，没有发夹结构，GC含量还可以，最好换一条，强行用的话扩增效率较低，正向引物好的话，应该可以扩出目的条带
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该用户由于违规已被禁言一辈子
7楼2016-03-30 16:50:53
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2016-03-30 17:01:55
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catheyyling

铜虫 (小有名气)
你试试 如果做的不好 根据兼并密码子原则可以把5端或者中间的一两个碱基改一下 先把基因扩出来

发自小木虫IOS客户端
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catheysun
9楼2016-04-02 20:58:45
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