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zhangchong12

新虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶回收的问题已有3人参与

第一个图片是我进行琼脂糖凝胶回收的图片,将跑的条带切下之后,进行胶回收,条带在310bp左右,Marker三用的,在切胶回收时,没有切下多余的条带。回收之后测得的浓度为70ng/ul左右,取样品大约4ul进行胶回收检测,却有量条带,怎么回事啊,实在想不通,求大神指点啊。

琼脂糖凝胶回收的问题
U1A overlap PCR 2016-03-16 17 时 58 分.jpg


琼脂糖凝胶回收的问题-1
U1A overlap 胶回收检测 2016-03-17 13 时 27 分.jpg
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
造成这样原因,主要是你回收时目的条带浓度很高,在进行电泳时,难免会有一些杂带和你的目的条带混在一起,在琼脂糖胶过程中没有分开。这应该是常见的现象,一般就是通过把样品分多孔电泳,并延长电泳时间,切胶时尽量切主条带来避免,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
12楼2016-03-17 21:33:57
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普通回帖

zhangchong12

新虫 (小有名气)

图二为胶回收检测的图片

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2楼2016-03-17 14:11:16
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

在目的产物上面有一条微弱的带

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-03-17 14:12:16
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生科深似海

新虫 (小有名气)

胶块切大了  可以胶条切细点

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4楼2016-03-17 14:39:15
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是PCR扩增的问题,条带特异性不是特别好。
5楼2016-03-17 14:48:15
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 生科深似海 at 2016-03-17 14:39:15
胶块切大了  可以胶条切细点

胶块上边缘 我都没有切 留了一部分
6楼2016-03-17 15:17:01
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-17 14:48:15
应该是PCR扩增的问题,条带特异性不是特别好。

我切的那个条带,跑电泳的时候 只有一条带 没有多余的带啊
7楼2016-03-17 15:18:39
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生科深似海

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhangchong12 at 2016-03-17 15:18:39
我切的那个条带,跑电泳的时候 只有一条带 没有多余的带啊...

两张图片比较  大的应该是杂带

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8楼2016-03-17 15:42:09
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 生科深似海 at 2016-03-17 15:42:09
两张图片比较  大的应该是杂带
...

什么意思 第一张图片 最亮的那个位置 就是我要的条带 也是很单一 上边会有一些杂带

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9楼2016-03-17 15:50:17
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生科深似海

新虫 (小有名气)

你回收后的杂带大小和回收前大小好像一样唉

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10楼2016-03-17 15:51:38
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