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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物测序结果分析
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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果分析 已有5人参与

我想验证PCR产物对不对，送到公司测序，结果不会看请教大家，我的目的片段大小是107，公司测序结果是以上游引物得到测序结果，片段是72，但是结果报告上是说片段大小是107，测序成功。我在网上查到一种原因说是因为PCR测序的前后端容易变，所以将其去掉。不知道这种说法对不对。非常急，请教大家
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1楼 2016-03-10 12:19:16
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小南@

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
mtyx: 金币+1 2016-03-22 09:58:38
你可以看下测序公司发给你的峰图，和自己的目的序列作对比
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5楼2016-03-13 12:49:43
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ken19860823

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mtyx: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2016-03-10 13:01:48
不太理解你说的，你的片段如果是PCR直接测序的话，有点小，单向测序一般只能测引物后面20bp以后的序列，因为测序前期容易受引物干扰，所以一般20bp后面为可靠数据。测序机构给你的如果是原始数据会包含这20bp，如果是处理的，他一般会帮你去掉。
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做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-10 12:56:47
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mtyx: 金币+1, ★有帮助 2016-03-22 09:59:07
条件云溪最好是切胶回收转入克隆载体，摇菌测序，这样可以把你的全部序列测得（测序所用是载体引物），对于小片段的测序挺好的，直接PCR产物测序很容易两头缺失，拿不到完整结果。
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3楼2016-03-10 17:00:40
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mtyx: 金币+1, ★有帮助 2016-03-22 09:58:54
一般测序公司测序反应成功，可以获得600～800的可信序列，你订单上虽然标注107bp，但测序公司结果一般一个反应下来，都会大于107的，没看懂你的意思，测序公司发给你的结果是帮你分析处理后剩下的70多？

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-03-10 17:57:00
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