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PCR产物直接测序与克隆菌液测序区别
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各位虫友好！ 有些变异较大的片段PCR产物直接测序结果很不理想，克隆送菌液测序结果很好，测出来是目的片段，为什么两者测序有如此大差别？是因为PCR产物不单一还是其他原因，请各位帮忙分析，不胜感激！ |
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caihy119
银虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 欢迎交流 2011-06-12 19:20:42
南海所老龚(金币+1): 谢谢 2011-06-12 20:11:01
lstt09nk(金币+3): 欢迎交流 2011-06-12 19:20:42
南海所老龚(金币+1): 谢谢 2011-06-12 20:11:01
| 如果你的PCR产物单一,而且没有杂质,也就是引物二聚体或dNTP等(PCR产物需要纯化)，那么测序的结果也是很好的。 如果做克隆测序，相当于你的PCR产物中的一条序列被纯化，测序了，所以效果是最好的， 当然需要作克隆这一步，时间和金钱花费不少！所以如果你的PCR产物很纯，即不是环境样品DNA的PCR产物，而是纯培养的细菌或其它的DNA的PCR产物，最方便的方法是PCR，纯化PCR产物，测序！ |
2楼2011-06-12 18:32:25