24小时热门版块排行榜

返回列表

小八儿11

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 49.6
帖子: 4
在线: 39分钟
虫号: 1346391
注册: 2011-07-15
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] PCR产物

我自己设计了一对引物，进行PCR之后，琼脂糖凝胶电泳显示是我所要的大小，我就进行了正常的连接转化后测序，可是测序结果却不是我想要的，我想知道是不是引物出现了问题，还是哪里出现了问题，希望大家能帮我分析一下，万分紧急啊~~~

回复此楼

» 猜你喜欢

RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点已经有0人回复
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有277人回复
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项已经有0人回复
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展已经有0人回复
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点已经有0人回复
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征已经有0人回复
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗已经有25人回复
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈已经有0人回复
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点已经有0人回复
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核已经有0人回复

1楼 2012-09-03 20:05:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

MolEPI: 17
应助: 237 (大学生)
金币: 4764.7
散金: 20
红花: 10
帖子: 852
在线: 419.2小时
虫号: 1609389
注册: 2012-02-10
性别: GG
专业: 污染控制化学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-04 13:44:44

你的模板处理掉了么？
切胶回收了么？
测序结果是什么个情况？
用的是什么酶？
这些条件都写出来，不然我们怎么知道你的问题出在什么地方。

赞一下

回复此楼

2楼2012-09-04 10:49:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小八儿11

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 49.6
帖子: 4
在线: 39分钟
虫号: 1346391
注册: 2011-07-15
专业: 微生物生理与生物化学

引用回帖:

2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 10:49:55
你的模板处理掉了么？
切胶回收了么？
测序结果是什么个情况？
用的是什么酶？
这些条件都写出来，不然我们怎么知道你的问题出在什么地方。

我pcr之后，进行了胶回收，使用的载体是pEASY，用的是全式金公司的TAP酶，测序结果就是在头部100bp左右能比对上，在末端100bp左右能比对上，比对匹配率只有7%左右。

赞一下

回复此楼

3楼2012-09-04 11:22:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

MolEPI: 17
应助: 237 (大学生)
金币: 4764.7
散金: 20
红花: 10
帖子: 852
在线: 419.2小时
虫号: 1609389
注册: 2012-02-10
性别: GG
专业: 污染控制化学

【答案】应助回帖

引用回帖:

3楼: Originally posted by 小八儿11 at 2012-09-04 11:22:24
我pcr之后，进行了胶回收，使用的载体是pEASY，用的是全式金公司的TAP酶，测序结果就是在头部100bp左右能比对上，在末端100bp左右能比对上，比对匹配率只有7%左右。...

从你的结果上看，是你的基因没连接上啊。
你连接是双酶切连接还是普通的共转化连接？
你有没有做菌落PCR或者提出质粒后酶切鉴定？

赞一下

回复此楼

4楼2012-09-04 13:42:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖