应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物
51/1返回列表
查看: 870  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小八儿11

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物

我自己设计了一对引物，进行PCR之后，琼脂糖凝胶电泳显示是我所要的大小，我就进行了正常的连接转化后测序，可是测序结果却不是我想要的，我想知道是不是引物出现了问题，还是哪里出现了问题，希望大家能帮我分析一下，万分紧急啊~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-09-03 20:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小八儿11

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 13:42:40
从你的结果上看，是你的基因没连接上啊。
你连接是双酶切连接还是普通的共转化连接？
你有没有做菌落PCR或者提出质粒后酶切鉴定？...

应该是连接上了，我做菌液pcr也做质粒pcr了，但是没做酶切验证啊，是不是我设计的引物问题比较大啊？
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-05 10:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-04 13:44:44
你的模板处理掉了么？
切胶回收了么？
测序结果是什么个情况？
用的是什么酶？
这些条件都写出来，不然我们怎么知道你的问题出在什么地方。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-04 10:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小八儿11

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 10:49:55
你的模板处理掉了么？
切胶回收了么？
测序结果是什么个情况？
用的是什么酶？
这些条件都写出来，不然我们怎么知道你的问题出在什么地方。

我pcr之后，进行了胶回收，使用的载体是pEASY，用的是全式金公司的TAP酶，测序结果就是在头部100bp左右能比对上，在末端100bp左右能比对上，比对匹配率只有7%左右。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-04 11:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小八儿11 at 2012-09-04 11:22:24
我pcr之后，进行了胶回收，使用的载体是pEASY，用的是全式金公司的TAP酶，测序结果就是在头部100bp左右能比对上，在末端100bp左右能比对上，比对匹配率只有7%左右。...

从你的结果上看，是你的基因没连接上啊。
你连接是双酶切连接还是普通的共转化连接？
你有没有做菌落PCR或者提出质粒后酶切鉴定？
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-04 13:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭