应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物
81/1返回列表
查看: 867  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小八儿11

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物

我自己设计了一对引物，进行PCR之后，琼脂糖凝胶电泳显示是我所要的大小，我就进行了正常的连接转化后测序，可是测序结果却不是我想要的，我想知道是不是引物出现了问题，还是哪里出现了问题，希望大家能帮我分析一下，万分紧急啊~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-09-03 20:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-04 13:44:44
你的模板处理掉了么？
切胶回收了么？
测序结果是什么个情况？
用的是什么酶？
这些条件都写出来，不然我们怎么知道你的问题出在什么地方。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-04 10:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小八儿11

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 10:49:55
你的模板处理掉了么？
切胶回收了么？
测序结果是什么个情况？
用的是什么酶？
这些条件都写出来，不然我们怎么知道你的问题出在什么地方。

我pcr之后，进行了胶回收，使用的载体是pEASY，用的是全式金公司的TAP酶，测序结果就是在头部100bp左右能比对上，在末端100bp左右能比对上，比对匹配率只有7%左右。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-04 11:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小八儿11 at 2012-09-04 11:22:24
我pcr之后，进行了胶回收，使用的载体是pEASY，用的是全式金公司的TAP酶，测序结果就是在头部100bp左右能比对上，在末端100bp左右能比对上，比对匹配率只有7%左右。...

从你的结果上看，是你的基因没连接上啊。
你连接是双酶切连接还是普通的共转化连接？
你有没有做菌落PCR或者提出质粒后酶切鉴定？
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-04 13:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小八儿11

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-04 13:42:40
从你的结果上看，是你的基因没连接上啊。
你连接是双酶切连接还是普通的共转化连接？
你有没有做菌落PCR或者提出质粒后酶切鉴定？...

应该是连接上了，我做菌液pcr也做质粒pcr了，但是没做酶切验证啊，是不是我设计的引物问题比较大啊？
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-05 10:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序最有说服力，估计你p出来的不是目的片段，你可以选用你目的片段中的一个酶切位点，再加上载体上的酶切位点，双酶切试试。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-09-05 10:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小八儿11 at 2012-09-05 10:22:05
应该是连接上了，我做菌液pcr也做质粒pcr了，但是没做酶切验证啊，是不是我设计的引物问题比较大啊？...

你如果都连接上了，那么和引物的关系就不是很大了
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-09-05 12:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asdkingstar

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小八儿11 at 2012-09-05 10:22:05
应该是连接上了，我做菌液pcr也做质粒pcr了，但是没做酶切验证啊，是不是我设计的引物问题比较大啊？...

双酶切主要作用是缩小你需要测序的范围，减少测序资金。与你这个问题关系不大。
赞一下 回复此楼
爱是浅浅的喜欢，喜欢是浅浅的爱。
8楼2012-09-05 17:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小八儿11 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-16 07:12 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:36 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:24 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:11 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:59 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-16 03:26 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:59 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:25 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭