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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果分析 已有5人参与

我想验证PCR产物对不对,送到公司测序,结果不会看请教大家,我的目的片段大小是107,公司测序结果是以上游引物得到测序结果,片段是72,但是结果报告上是说片段大小是107,测序成功。我在网上查到一种原因说是因为PCR测序的前后端容易变,所以将其去掉。不知道这种说法对不对。非常急,请教大家
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ken19860823

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2016-03-10 13:01:48
不太理解你说的,你的片段如果是PCR直接测序的话,有点小,单向测序一般只能测引物后面20bp以后的序列,因为测序前期容易受引物干扰,所以一般20bp后面为可靠数据。测序机构给你的如果是原始数据会包含这20bp,如果是处理的,他一般会帮你去掉。
做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-10 12:56:47
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+1, 有帮助 2016-03-22 09:59:07
条件云溪最好是切胶回收转入克隆载体,摇菌测序,这样可以把你的全部序列测得(测序所用是载体引物),对于小片段的测序挺好的,直接PCR产物测序很容易两头缺失,拿不到完整结果。
3楼2016-03-10 17:00:40
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+1, 有帮助 2016-03-22 09:58:54
一般测序公司测序反应成功,可以获得600~800的可信序列,你订单上虽然标注107bp,但测序公司结果一般一个反应下来,都会大于107的,没看懂你的意思,测序公司发给你的结果是帮你分析处理后剩下的70多?

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-10 17:57:00
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小南@

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1 2016-03-22 09:58:38
你可以看下测序公司发给你的峰图,和自己的目的序列作对比
5楼2016-03-13 12:49:43
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thinka

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1, 有帮助 2016-03-22 09:58:21
测序公司没有给你原始峰图,他们应该是吧前边的染料峰给你截掉了
6楼2016-03-13 17:00:03
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