his蛋白挂柱效率低
C端6xhis蛋白(108kda)纯化时,使用GE的6FF树脂,载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白,确定不过载。
且质粒测序结果正确,ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。
改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
求助该如何解决呢
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C端6xhis蛋白(108kda)纯化时,使用GE的6FF树脂,载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白,确定不过载。
且质粒测序结果正确,ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。
改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
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氯化钠浓度提高到1-1.5M
另外你需要搞清楚你标记的那条带到底是不是你的目的带。与目的带大小一致不一定是目的带,也可能是菌体蛋白。
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