his蛋白挂柱效率低
C端6xhis蛋白(108kda)纯化时,使用GE的6FF树脂,载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白,确定不过载。
且质粒测序结果正确,ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。
改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
求助该如何解决呢
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C端6xhis蛋白(108kda)纯化时,使用GE的6FF树脂,载量为每毫升树脂载40mg标签蛋白,确定不过载。
且质粒测序结果正确,ORF框及his标签均正确。
尝试将his标签增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。
改变上柱的粗酶液的浓度及上样标签蛋白量也没能改善
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试试FLAG把
缓冲液pH多少?缓冲液里咪唑含量有多少?
GE的6FF树脂什么的都无关紧要。你有用Ni树脂或Co树脂嘛?
1.上样我们一般咪唑浓度20mM。2.载量我们一般计算动态载量,最大载量我们一般是不考虑的,动态载量一般是最大载量的百分之30。3.根据柱直径,柱床高度,降低上样速度。
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