DNS试剂测定α-淀粉酶抑制剂活性
大家好,本人想测定某种物质对α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法测定产物糖的方法。
我是自己提取天然产物,然后买淀粉酶,测定天然产物对淀粉酶的抑制作用。
根据文献的步骤修改:精确吸取 0. 1mL的样品 和 0. 1mL 5U/mL的α-淀粉酶溶液(用浓度与样品与对照品区分不开),充分混匀,在 37℃下反应10 min,然后加入0.1mL 1%可溶性淀粉液,在 37 ℃水浴中准确反应 5 min。再加入 0.2mL DNS 显色剂,在沸水浴中反应 3 min,之后立即用流动自来水冷却 (终止反应),用PBS稀释10倍在 540 nm 波长下测定吸收度,记为 OD。
样品用2%DMSO*PBS配置、1%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水杨酸(DNS)溶液从试剂公司购买。
但是根据这个步骤做出来,样品组(样品+α-淀粉酶溶液),空白对照组(用2%DMSO*PBS代替样品,其他同上),阴性组(用PBS代替酶,其他与样品/空白组一致)煮沸6分钟后,红棕色颜色很深,PBS稀释减去阴性对照OD后,样品浓度梯度小时,样品组OD值与空白组OD值几乎差不多,样品吸光度参差不齐,无趋势,有几次做还会比空白组高。浓度梯度大时,有效果趋势。
求大神帮忙,我是试了好多还不出满意结果,希望各位大神提供帮助,谢谢!@lifeliuyan 返回小木虫查看更多
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朋友,你最近也在做吗?发现最近做这个的人越来越少了。出现问题也不知道找谁讨论了
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请问楼主做出来结果了么?原因是什么?
没有,找不出问题。
您好,请问这个问题解决了吗?该怎么解决呀?
请问楼主做出结果了吗?原因是什么呢?