关于FISH的一些疑问
我方向是环境工程偏微生物(厌氧氨氧化),需要观察反应器内活的厌氧氨氧化细菌随时间数量的变化。看文献的描述,测定的方法是测MLVSS结合live/dead实验以及FISH实验,我的问题是:
1)FISH实验中,能够与探针原位杂交的细菌只是活的嘛,还是死的活的都能与探针杂交?原理是为什么
2)FISH实验中为何需要用多聚甲醛等物质对细菌进行固定这一步骤?固定是指固定细菌的移动还是形状还是其它?不固定后果是什么?
望大神解答感激不尽!
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先回答(2),FISH的固定步骤主要是为了稳定大分子和细胞骨架结构,避免杂交的过程中细胞裂解。参考如下,