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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » SDS电泳图有条带，并没有酶活，有条带但是没酶活。是怎么回事呀。。。。。
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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS电泳图有条带，并没有酶活，有条带但是没酶活。是怎么回事呀。。。。。 已有1人参与

我最近在做基因的原核表达，表达载体为pET28a，宿主细胞为BL21。1：全菌体，2：超声后上清，3：穿透（就是样品上Ni柱之后流出的组分，为了检测样品与Ni的结合），4~6是不同洗脱梯度洗脱下来的样品。出现一个问题是：第3条带，理论上如果Ni柱比较好，蛋白质的His表达没问题的话，是没有蛋白条带而且没有酶活的。但现在的确看不清目的条带，但是有酶活，而且相对比较高。第5.6条带，明明有蛋白条带，但是酶活特别低。（怀疑过Ni柱的问题，但是Ni柱是比较新的而且是清洗重生过的Ni柱，看电泳图的话，应该是结合上了呀。）。。。急求各路高手指点！！！这是咋回事儿啊

SDS电泳图有条带，并没有酶活，有条带但是没酶活。是怎么回事呀。。。。。
SDS电泳
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1楼 2016-07-16 21:14:01
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
咪唑影响活性，建议透析后在做

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-07-16 21:16:50
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带，可能形成了包涵体，那样的话是没有酶活的
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···
3楼2016-07-17 14:47:23
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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:47:23
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带，可能形成了包涵体，那样的话是没有酶活的

多谢！但是从我的上清可以看出，我的蛋白还是以可溶的形式存在的比较多，而且粗酶液的测量也是有一定酶活的。但是挂Ni柱时候出现的问题是明明没有条带，但是出现接近粗酶液的酶活。。。。。。。
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4楼2016-07-18 15:51:58
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之子于归110

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:47:23
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带，可能形成了包涵体，那样的话是没有酶活的

我做硫酸铵分级沉淀的时候，30%硫酸铵上清有酶活，跑SDS，上清液没有条带，沉淀有明显条带。是怎么会是呢
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5楼2022-07-04 09:10:02
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之子于归110

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:47:23
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带，可能形成了包涵体，那样的话是没有酶活的

你好，我做硫酸铵分级沉淀的时候，30%硫酸铵上清有酶活，沉淀没有。但是跑SDS，上清液没有条带，沉淀有明显条带。是怎么会是呢
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6楼2022-07-04 09:12:07
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