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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS电泳图有条带,并没有酶活,有条带但是没酶活。是怎么回事呀。。。。。已有1人参与

我最近在做基因的原核表达,表达载体为pET28a,宿主细胞为BL21。1:全菌体,2:超声后上清,3:穿透(就是样品上Ni柱之后流出的组分,为了检测样品与Ni的结合),4~6是不同洗脱梯度洗脱下来的样品。出现一个问题是:第3条带,理论上如果Ni柱比较好,蛋白质的His表达没问题的话,是没有蛋白条带而且没有酶活的。但现在的确看不清目的条带,但是有酶活,而且相对比较高。第5.6条带,明明有蛋白条带,但是酶活特别低。(怀疑过Ni柱的问题,但是Ni柱是比较新的而且是清洗重生过的Ni柱,看电泳图的话,应该是结合上了呀。)。。。急求各路高手指点!!!这是咋回事儿啊

SDS电泳图有条带,并没有酶活,有条带但是没酶活。是怎么回事呀。。。。。
SDS电泳
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biosci

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咪唑影响活性,建议透析后在做

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-16 21:16:50
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小冀-

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带,可能形成了包涵体,那样的话是没有酶活的
···
3楼2016-07-17 14:47:23
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tlytwzwy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:47:23
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带,可能形成了包涵体,那样的话是没有酶活的

多谢!但是从我的上清可以看出,我的蛋白还是以可溶的形式存在的比较多,而且粗酶液的测量也是有一定酶活的。但是挂Ni柱时候出现的问题是明明没有条带,但是出现接近粗酶液的酶活。。。。。。。
4楼2016-07-18 15:51:58
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之子于归110

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3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:47:23
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带,可能形成了包涵体,那样的话是没有酶活的

我做硫酸铵分级沉淀的时候,30%硫酸铵上清有酶活,跑SDS,上清液没有条带,沉淀有明显条带。是怎么会是呢
5楼2022-07-04 09:10:02
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之子于归110

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-17 14:47:23
你跑胶的时候做一个超生后离心沉淀的对照~如果上清和沉淀里都有你的目的蛋白条带,可能形成了包涵体,那样的话是没有酶活的

你好,我做硫酸铵分级沉淀的时候,30%硫酸铵上清有酶活,沉淀没有。但是跑SDS,上清液没有条带,沉淀有明显条带。是怎么会是呢
6楼2022-07-04 09:12:07
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