HPLC：乙腈/水梯度洗脱，乙腈比例增大后吸光度降低。
各位大神，求助HPLC问题。
最近用HPLC测定苯酚，用的Kinetex 5u C18 100A的柱子，安捷伦的机子。
采用乙腈和水梯度洗脱：0-5 min 乙腈/水=20/80，也是这个比例调谐的；5-15 min 乙腈/水=95/5；15-20 min 乙腈/水=20/80。
刚开始的时候运行很正常，如图所示，当乙腈比例开始增大后UV的吸光度也有一点攀升。但是这周测试时发现当乙腈比例开始增加时，UV的吸光度开始变负，而苯酚正常出峰（如图：不是倒峰），算的浓度也正常。
想咨询一下各位大神这到底是出了什么问题？（压力正常，柱子也没问题，拆了柱子空着运行时，只要加大乙腈的比例吸光度就开始往负走）同一台机子，用低浓度硫酸做流动相测乙酸是完全正常。
我该怎么办。
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京公网安备 11010802022153号
乙腈-水体积的基线，和pH有很大关系。由于波长较低，造成基线不一致的情况有以下可能：
1. 不同天水的pH不一样。
2. 之前体系用了具有紫外吸收的流动相比如乙酸、甲酸等，体系不干净，造成基线漂移。估计你多数是第二种情况。冲冲系统就好了，
好吧，是水被污染了。虽然说还是想不明白为什么什么东西污染了水，跟乙腈混合后能让吸光度降低