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HPLC:乙腈/水梯度洗脱,乙腈比例增大后吸光度降低。 已有1人参与
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各位大神,求助HPLC问题。最近用HPLC测定苯酚,用的Kinetex 5u C18 100A的柱子,安捷伦的机子。 采用乙腈和水梯度洗脱:0-5 min 乙腈/水=20/80,也是这个比例调谐的;5-15 min 乙腈/水=95/5;15-20 min 乙腈/水=20/80。 刚开始的时候运行很正常,如图所示,当乙腈比例开始增大后UV的吸光度也有一点攀升。但是这周测试时发现当乙腈比例开始增加时,UV的吸光度开始变负,而苯酚正常出峰(如图:不是倒峰),算的浓度也正常。 想咨询一下各位大神这到底是出了什么问题?(压力正常,柱子也没问题,拆了柱子空着运行时,只要加大乙腈的比例吸光度就开始往负走)同一台机子,用低浓度硫酸做流动相测乙酸是完全正常。 我该怎么办。 @学术巨星 @wyy080214 @superyeast @klicking 发自小木虫Android客户端 |
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hexued6933
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2楼2021-03-06 13:21:14
送红花一朵 |
非常感谢你的回答。现在测纯水也是当乙腈比例增大后往负了跑,所以应该不是第一种情况。第二种可能,我的确是有时候测乙酸,有时候测苯酚(柱子不一样),但是这次出现这种情况后前前后后冲洗了两三天,也试着升温冲洗看是有什么难溶的物质没有,结果还是没啥变化 ![]() ![]() 发自小木虫Android客户端 |
3楼2021-03-06 22:36:12
4楼2021-03-08 16:32:30
5楼2021-03-09 19:10:06













各位大神,求助HPLC问题。
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