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[求助]
HPLC：乙腈/水梯度洗脱，乙腈比例增大后吸光度降低。 已有1人参与
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 各位大神，求助HPLC问题。最近用HPLC测定苯酚，用的Kinetex 5u C18 100A的柱子，安捷伦的机子。 采用乙腈和水梯度洗脱：0-5 min 乙腈/水=20/80，也是这个比例调谐的；5-15 min 乙腈/水=95/5；15-20 min 乙腈/水=20/80。 刚开始的时候运行很正常，如图所示，当乙腈比例开始增大后UV的吸光度也有一点攀升。但是这周测试时发现当乙腈比例开始增加时，UV的吸光度开始变负，而苯酚正常出峰（如图：不是倒峰），算的浓度也正常。 想咨询一下各位大神这到底是出了什么问题？（压力正常，柱子也没问题，拆了柱子空着运行时，只要加大乙腈的比例吸光度就开始往负走）同一台机子，用低浓度硫酸做流动相测乙酸是完全正常。 我该怎么办。   @学术巨星 @wyy080214 @superyeast @klicking 发自小木虫Android客户端 |
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送红花一朵 |
非常感谢你的回答。现在测纯水也是当乙腈比例增大后往负了跑，所以应该不是第一种情况。第二种可能，我的确是有时候测乙酸，有时候测苯酚（柱子不一样），但是这次出现这种情况后前前后后冲洗了两三天，也试着升温冲洗看是有什么难溶的物质没有，结果还是没啥变化  发自小木虫Android客户端 |
3楼2021-03-06 22:36:12
hexued6933
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