HRP高碘酸钠法标记中各组分的作用是什么?
HRP标记主要采用高碘酸钠法,HRP的活化过程如下:
①. 称取HRP酶适量,用纯水配置为5mg/ml的HRP液体;
注:当HRP从-20℃取出后,一定要平衡到室温,否则HRP冻干品易潮解。称量时不要用称量纸,不要用工具取HRP,应将HRP直接小心地倒入要用来溶解HRP的器具中。在倒HRP时,不要在风口(如电风扇风,自然风,呼吸)操作,因为HRP冻干品质轻易飞扬;尽量不要说话,以防污染。HRP尽量不要回倒,以防污染。当HRP量小于10 mg时,溶解器具可用干净Eppendoff tube,HRP量大于10 mg时,则要求用体积稍大的小玻璃瓶。
②. 用新鲜配制的0.1M NaIO4溶液,按每mg HRP酶加入34μl,避光放置4℃放置1hrs;
③. 按每mg HRP酶加入25μl的量加入乙二醇,避光放置4℃,30分钟;
④. 装入透析袋中,用1mM醋酸缓冲液(pH4.0~4.4)透析过夜,期间至少换液2次,均要求避光。
目前搞不懂的主要是:
1、HRP活化后为什么需要用pH4.4的乙酸钠缓冲透析?这一步的作用是什么?
2、HRP活化时加入乙二醇的作用是什么?
希望有高手能解惑。 返回小木虫查看更多
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