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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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[交流] HRP高碘酸钠法标记中各组分的作用是什么？

HRP标记主要采用高碘酸钠法，HRP的活化过程如下：
①. 称取HRP酶适量，用纯水配置为5mg/ml的HRP液体；
注：当HRP从-20℃取出后，一定要平衡到室温，否则HRP冻干品易潮解。称量时不要用称量纸，不要用工具取HRP，应将HRP直接小心地倒入要用来溶解HRP的器具中。在倒HRP时，不要在风口（如电风扇风，自然风，呼吸）操作，因为HRP冻干品质轻易飞扬；尽量不要说话，以防污染。HRP尽量不要回倒，以防污染。当HRP量小于10 mg时，溶解器具可用干净Eppendoff tube，HRP量大于10 mg时，则要求用体积稍大的小玻璃瓶。
②. 用新鲜配制的0.1M NaIO4溶液，按每mg HRP酶加入34μl，避光放置4℃放置1hrs；
③. 按每mg HRP酶加入25μl的量加入乙二醇，避光放置4℃，30分钟；
④. 装入透析袋中，用1mM醋酸缓冲液（pH4.0~4.4）透析过夜，期间至少换液2次，均要求避光。

目前搞不懂的主要是：
1、HRP活化后为什么需要用pH4.4的乙酸钠缓冲透析？这一步的作用是什么？
2、HRP活化时加入乙二醇的作用是什么？

希望有高手能解惑。

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