引用回帖:

8楼: Originally posted by hellohuo at 2020-12-12 09:21:04
还有想问问，CRISPR对于多倍体的植物来说，如果想要拿到纯合的突变体材料，是不是在转化完之后，第一代转基因株系还得进行回交或者自交？一到两代后，才能拿到纯合体，看表型？CRISPR小白，纯好奇问，谢谢！...

1：研究对象是拟南芥？是单子叶植物还是双子叶植物？载体不同侵染物种不同，但无论是什么植物基本上CRISPR都需要构建双元载体，U6启动子的中间载体，及连接Cas9的表达载体（pYAO-AtU6-Cas9侵染拟南芥，而pCA1300-OsU6-Cas9适合水稻）
2：理论上讲Cas9会切割基因组DNA双链，再设计sgRNA靶点NGG，的N位点，DNA利用修复产生错配，造成替换，串码，提前终止，再侵染完成后的T1代就能拿到纯合株系！注意，此时的纯合株系里含有Cas9融合蛋白，需于野生型杂交将Cas9分离筛掉
3: 若是你的基因功能在植物生长发育阶段起到了重要功能，若是缺失了，肯定会有表型的（包括杂合）
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还是crispr吧，干扰已经不行了