一个信号通路多个蛋白western blot结果是否必须一个时间点、一张膜出结果？？？
请问各位老师：
大家好！！！
今天做western blot时候，信号通路涉及多个蛋白，我做的时候，一位老教师（60左右）告诉我，一个信号通路的所有蛋白就要放到一张膜，一个时间点去做。并且要全部在一张膜同时出才是可用，同时三次重复都要这样做。
我想：一个信号通路蛋白比较多的时候，有的分子量比较接近，怎么可能在一张膜上出呢？？？这么多蛋白，也不可能同时出啊？？？
我很迷茫，请各位给予建议？？？
谢谢大家！！！
如下面这个信号通路
图.jpg
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京公网安备 11010802022153号
必须是同一个样品同时做的，尽量从一张膜来。除了剪裁膜以外，可以用抗体剥离缓冲液剥离抗体然后重新孵育其他的抗体，如果抗体来自不同种属还可以用叠氮钠抑制前一个抗体然后检测后一个抗体。一般一张膜可以检测3-5个不同的抗体没难度。
但是有的分子量确实太近没法剪裁，反复剥离一抗二抗会导致信号太弱检测不出来，迫不得已可以把同一个样品上样两遍，