需要使用NPN来测定细菌外膜破损情况,在配置NPN溶液时,在加入少量乙醇溶解NPN后,用HEPES/PBS/0.85 %进行稀释至工作浓度。但是在稀释过程中,溶液出现乳白色的浑浊,为啥?有什么解决方法吗? 返回小木虫查看更多
乙醇溶解NPN之后,当时浓度是多少?
乙醇溶解NPN之后,当时浓度是多少?
现在是0.003 g NPN用680微升无水乙醇溶解,再加入10 毫升30 %DMSO,NPN最终浓度为1 mM,现在暂时配置到这里,NPN未出现白色浑浊,之后打算用30 %DMSO稀释至工作浓度40 微摩。实验是将细菌作为处理对象,请问会有影响吗?这个操作方法对吗?
怀疑你的NPN工作浓度太高了。
我查文献看到的NPN工作浓度是10μM。
https://www.nature.com/articles/s41598-017-17772-6
(20μM NPN工作溶液与OD600=1的标准菌液以1:1(v/v)混合)
http://cmdr.ubc.ca/bobh/method/n ... cence-measurements/
(1ml OD600=0.5的标准菌液加入20μl 0.5 mM NPN溶液)
https://www.sciencedirect.com/sc ... i/S0960852414008013
( The fluorescence emission of 3 mL cell suspension with and without sophorolipid mixed with NPN (final concentration of 10 μM) was recorded at the excitation wavelength of 355 nm.)
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40 μM NPN溶液是工作加入时的浓度,实验终浓度为10 μM。在配置NPN母液(1 mM)时,它会变得浑浊,在稀释后会成澄清状态,但是这个浑浊会影响实验吗?我实验结果前后荧光数值变化不大,且没有任何趋势,为啥呢?请问您做过相关实验吗?想求助一下您。(。・ω・。