DNS法测定α淀粉酶抑制实验
新手做酶,做的是某种功能因子对α淀粉酶的抑制作用,采用DNS法,是很多种英文文献经常用的方法
1:加500ul的样品,然后加500ul 0.5mg/ ml的淀粉酶,然后28度放置10分钟。
2:然后加500ul的1%的可溶性淀粉溶液。再28度放置10分钟。
3:最后加入500ul DNS显色剂。100度沸水煮5分钟。冷却置室温,定容至10ml.
淀粉酶和可溶性淀粉都是用的0.02M PBS(含氯化钠)。
我用的酶是上海源叶生物的粉末猪胰酶,
在溶解可溶性淀粉时候直接室温溶解,结果淀粉都会沉淀下来,取得上清液,这个操作准确吗?还是用沸水稍微沸一下呢?
但是最后用DNS煮沸的时候颜色都会变得差不多,就连最常用的酶抑制剂阿卡波糖颜色都差不多,根本无抑制可言。。我查了很多资料,也没有找到问题,请各位大佬指点迷津。。谢谢啦!
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我查资料看到别人用的sigma的猪胰腺淀粉酶,我用的也是猪胰腺淀粉酶,只是公司不同,这个应该没有啥问题吧!
另外DNS也是配置放了10多天采用的。
做不出来我觉得我快抑郁啦!。。。,
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可溶性淀粉在沸水才会溶解